利用荧光显微镜高通量测定微生物出生及死亡速度

    为了能够自动测定荧光酵母的生长及死亡速度，作者首先对荧光显微镜进行了设置（如图1），即对常规的荧光显微镜补加一些附件。恒温罩（Enclosure）保持细胞样品温度，自动移动的平台（Motorized stage）可以重复对很多样品用明场和荧光进行拍照，自动转换的滤片（Motorized filter cubes）可以自动进行滤片切换，ITO Lid warmer（热盖玻璃）则避免了拍照过程中水蒸气在盖子上的凝结。此外，作者还专门写了一个“LabVIEW”程序，该程序可以自动在明场对焦，然后转到荧光下对酵母进行拍照，从而减少光毒性对微生物生长的影响。

    通过上述荧光显微镜的设置，作者对lys2-和ade8-这两种酵母的生长及死亡速率进行了测定，并比较了不同测定方法的结果。lys2-和ade8-是两种分别需要Lys（赖氨酸）和Ade（腺嘌呤）才能成长酵母突变体。结果表明，lys2-和ade8-分别在缺乏Lys和Ade的培养基中生长时，其死亡速度均呈现出时间依赖性；并且它们的死亡速度分别与Lys和Ade的浓度有关（如图2）。此外，荧光显微镜自动检测法与手动检测法及流式细胞仪检测法相比，其结果与后两种的检测结果基本一致。

    另外，作者发现极低浓度的营养可能不会被微生物消耗，并且低浓度营养物会导致不同菌株以不同的速度死亡和出生（如图3）。其原因可能是菌株没有在低浓度营养物培养的条件下进化过，因此不同基因型产生不同的生长速度。

     此外，在描述lys2-和ade8-的细胞生长速度时，作者发现Moser（S-型）模型要优于Monod模型。

    最后，作者希望通过这种高通量荧光显微镜定量测定法，能为今后荧光微生物生长的测定提供一种简单，快速，准确的方法。